设为首页 收藏本站 English

当前位置: 七彩农业网 >> 平卧鼠李

猪场又出现一种可引起母猪共济失调流产或突然死亡的新疫病毛山芹

发布时间:2022-10-26 09:43:17

猪场又出现一种可引起母猪共济失调、流产或突然死亡的新疫病

尼帕病毒病(NVD) 是由尼帕病毒引起的一种新的人畜共患病毒性疾病,于1997 年在马来西亚森美兰洲双溪尼帕城首次发现,是继疯牛病、口蹄疫、禽流感后又一引起世界各国广泛关注和恐慌的人畜共患病。生猪感染该病毒后,出现发热、呼吸困难及脑炎症状;母猪感染该病毒后表现为共济失调等神经症状,可能会导致流产或突然死亡;人感染该病毒后发生病毒性脑炎而死亡。由于其引起人感染后的高死亡率,缺乏有效的疫苗和治疗方法,因此世界动物卫生组织(OIE) 和我国农业部都将其列为生物安全4 级病原体。

1、概况

尼帕病毒病是由副黏病毒科亨尼帕病毒属(Henipavi rus) 的尼帕病毒(NiV) 引起的一种人畜共患传染病。NiV是新发现于蝙蝠的一种副黏病毒,1999 年3 月初, 从Sungai Nipah 村1名脑炎患者的脑脊液中分离到了一种新的副黏病毒,并确定为该次暴发的病原,因此命名为尼帕病毒(Nipah virus)。血清学检测显示,家养动物如狗、猫、马和山羊均可感染尼帕病毒,但猪是其他家养动物的传染源。尼帕病毒可感染不同年龄的猪,从1998 年马来西亚暴发尼帕病毒病以来,已造成许多人和猪伤亡,引起了巨大的社会恐慌,并给养猪业造成严重的经济损失。

2、实验室诊断技术

2.1 病原学检测

2.1.1 NiV 分离鉴定

NiV 能够在多种培养细胞中生长并快速增殖至较高的滴度。非洲绿猴肾细胞和兔肾细胞RK-13 细胞系对NiV 尤为敏感。通常在病毒感染3 d 内能够观察到病毒病变效应(CPE),但一般来说在细胞上传代2 次,每次5 d 所达到的分离效果更为稳定。经低毒量稳定传代后的病毒再次感染细胞后24 ~ 48 h,细胞出现以形成合胞体为特征的CPE,并且感染早期,合胞体中所有细胞核位于合胞体中央,而晚期则被运送至合胞体外,并聚集在其周围。由于NiV 在体外细胞培养中扩增迅速,并且能产生大量的病毒抗原,所以采用免疫荧光或免疫电镜法检测分离培养该病毒,最为方便快速。

2.1.2 分子诊断技术

NiV 的基因组全序列已被测出,研究者们可以在此基础上针对NiV 的分子诊断技术进行相应的研发。目前,已经被报道的针对NiV 的分子检测技术有2 种,分别为荧光定量RT-PCR和双重套式RT-PCR。

2.1.2.1 荧光定量RT-PCR

该方法敏感度高、特异性强,并且不需要接触活的感染性病毒,具有生物安全性的优势。其检测灵敏度可以达到 1 个空斑形成单位( PFU),并且有被学术界普遍认可的相关引物和探针有:

5′-TCAGCAGGAAGGCAAGAGAGTAA-3′(Primer1),

5′-CCCCTTCATCGATATCTTGATCA-3′(Primer2),

5′-6FAM-CCTCCAATGAGCACACCTCCTGCAGTAMRA-3 ′(TaqMan probe),为NiV 的实验室快速诊断提供了技术支持。

2.1.2.2 双重套式RT-PCR :

Wacharapluesadee 等描述了一种带有内参的双重套式RT-PCR 检测技术。该技术能够用于对果蝠尿样的检测,并且加入内参大大降低PCR 相关的抑制因素带来的假阴性的结果,提高检出准确率,在NiV 流行病学调查时大大提高 NiV 监测数据的可靠性。

2.1.3 其他诊断技术

主要针对NiV 全病毒抗原或病毒主要致病抗原(如F 蛋白和G 蛋白等)制备特异性的病毒抗血清或单克隆抗体,在此基础上建立病毒中和试验、免疫组化以及免疫荧光等方法检测NiV相关抗原。病毒中和试验主要包括传统的空斑抑制试验、微孔板中和试验以及免疫空斑试验3种,分别通过计算空斑形成单位(PFU)、组织培养半数感染量(TCID50)以及病灶形成单位(FFU)达到检测病毒抗原或抗体的目的。检测NiV 的病毒中和试验需要在BSL4 级生物实验室进行,但近年来研究者们陆续开发了几种实验室检测技术,能够将检测NiV的生物安全水平降低至 BSL2 级,为偏远地区NiV 检测提供了帮助。由于NiV 原发于血管内壁,所以病死畜的多个器官均可用于免疫组化的检测,尤其是肺脏。

目前,研究者们已经针对NiV 的免疫组化法检测研发了几个检测体系,为该病毒的实验室检测提供了技术支持。

2.2 血清学检测

鉴于NiV 的生物危害性,用于该病毒血清学诊断的所有血清样品必需进行安全化处理,以尽量减少实验室工作人员接触NiV 的风险。可以用6 kGy的γ 射线辐照或含0.05% Tween20和0.5% Triton—X100 PBS(磷酸缓冲液) 1/5 稀释后56 ℃ 30 min 灭活的方法对血清样品进行前处理。目前常用的NiV 的血清学检测方法包括病毒中和试验和ELISA 试验。

2.2.1 病毒中和试验

目前针对NiV 抗体检测的病毒中和试验已经有相关的标准方法,Kaku等人利用基因重组技术构建了共表达NiV F 或G 蛋白与绿色荧光蛋白(GFP)的重组水泡性口炎病毒,作为已知病毒抗原检测NiV 血清样本,用该重组病毒作为已知病毒抗原的好处在于GFP是可见的,可以在荧光显微镜下直观地数出荧光斑点的数量而获知血清样品中NiV 特异性抗体的含量。该方法要比传统的中和试验更为迅速、安全和灵敏。 Tamin 同样也利用基因重组技术构建了单独表达F 或G 蛋白的重组水泡性口炎病毒作为已知抗原,检测NiV 抗体,并在此基础上建立了检测 NiV 抗体的空斑抑制试验。

2.2.2 ELISA

目前, 针对NiV 抗体检测的ELISA 技术已经开发出间接ELISA 和捕获ELISA 2 种。Daniels 在1999年召开的国际猪病监测会议中提出了一种用非离子去污剂处理NiV 感染的细胞以获得ELISA 检测用NiV 抗原的方法,随后,为消除ELISA 的非特异性,研究者们又在此基础上加入了非感染细胞作为对照。美国疾病控制中心开发出能够检测针对NiV IgG 和IgM 2 种亚型免疫球蛋白的ELISA 技术。此外,Yu 等人也报道过用NiV N 蛋白作为病毒抗原检测IgG 和IgM 2 种亚型免疫球蛋白的ELISA 方法。

3、防控措施

目前对该病尚无有效的药物和治疗方法,只能采取强制措施,监测并淘汰患病动物,以免传染给人;防止家猪与野猪的接触;禁止运输和进口患病猪及其肉制品;对猪舍进行消毒,搞好清洁卫生工作。人感染后,用广谱抗病毒药Ribavirin( 利巴韦林),可减少发烧时间,缓解发病程度,降低急性脑炎死亡率。随着科学家对这一病原的不断了解,人们利用疱疹病毒为载体进行F、G 融合蛋白克隆,并在大肠杆菌中进行表达,有可能用来防治尼帕病毒的感染,其他相关的疫苗正在研究开发中。

肇庆靠谱长途救护车怎么收费今日市场一览表

新闻济南清洗储罐报价今日商情一览表

2022今日新闻荆门电力穿线钢管厂家直供

交通划线天津河东区水除线图解路佳市政经验丰富2022刚更新

淮安写节能报告上会评审今日机构2022已更新

友情链接